Application of TRIS Buffer in Plasmid Extraction by Agarose Electrophoresis

Трис (тригидроксиметиламинометан) является слабой основой с pKa 8,1 при комнатной температуре 25°C и эффективным буферным диапазоном pH 7,0 ~ 9.2pH водного раствора Tris-алкалия составляет около 10.5Поскольку Трис-буфер представляет собой слабощелочный раствор, то, как правило, добавляется соляная кислота для регулирования значения pH до желаемого значения, чтобы получить буфер этого значения pH.ДНК будет депротонирована в таком растворе., тем самым улучшая его растворимость. Если кислотный раствор, регулируемый pH, заменить уксусной кислотой, получится "буфер TAE" (Tris/Acetate/EDTA),в то время как "буфер TBE" (Tris/Borate/EDTA) получается путем замены его борной кислотой.Эти два буфера обычно используются в экспериментах по электрофорезу нуклеиновых кислот. TAE, TBE и т.д., подготовленные Tris, являются наиболее часто используемыми реагентами для электрофореза ДНК, а TE (pH 8.0) используется в основном для растворения ДНК.(TE представляет собой комбинацию Tris и EDTA.) 1MTris-HCl6.8 и 1.5MTris-HCl8.8 являются наиболее часто используемыми реагентами для SDS-PAGE.

Реагент TRIS

Среди обычных операций генной инженерии наиболее широко используется электрофорез гелем агарозы.идентификация и очистка фрагментов ДНКОбычно используется горизонтальное устройство электрофореза для электрофореза под электрическим полем с постоянной интенсивностью и направлением.Молекулы ДНК имеют отрицательный заряд в гелевых буферах (обычно щелочных) и переходят с отрицательных на положительные электроды в электрическом полеСкорость миграции молекулы ДНК зависит от размера и конформации молекулы.Влияние силы и направления электрического поля, состав основы, температура и встроенные красители,и т.д..

Операцияпроцесс:

1 TE буфер: (10 ммоль/л Tris-HCl, 1 ммоль/л EDTA)

Буфер электрофореза (50XTAE)

2 Буфер электрофореза (50XTAE): Tris 242g, ледяная уксусной кислоты 57, 1 мл, EDTA (0, 5mol/ L pH 8, 0) 100 мл

При использовании разбавлять 50 раз дистиллированной водой.

3 Буфер пробы (6X): 0,25% бромфенолового синего, 0,25% ксиленового синего, 40% (В/В) сахарозы

4 STET буфер (pH 8,0) (8% сахарозы, 0,5% тритона, 50 ммоль/л EDTA, 10 ммоль/л Tris)

1) Измерить 100 мл раствора электрофореза TAE, добавить 0,7 г агарозы, хорошо перемешать, поместить в микроволновую печь, подогреть в течение 3 минут, полностью растворить агарозу.

2) Закройте чистую и сухую электрофоретическую пластину стерилизованной резиной и запечатайте край небольшим количеством раствора агарозы.Поместить гребень и регулировать расстояние между нижним краем гребеня и электрофорезной пластины, как правило, 1-2 мм является подходящим.

3) Когда растворенный раствор агарозы охлаждается примерно до 50 °C, добавляется 5 Мл бромида этидия, и конечная концентрация бромида этидия составляет 1,0 мг/мл.залить раствор агарозы в пластину электрофореза и держать его неподвижно, не двигаясь.

4) После того, как гель полностью затвердеет (30-45 минут при комнатной температуре), аккуратно снимите гребень, снимите ленту и поместите гель в подложку электрофореза.

5) В процессе электрофореза раствор электрофореза (1'TAE) добавлялся для покрытия поверхности геля агарозы около 1-2 мм раствором электрофореза.