Буфер метода 1,4-Piperazinediethanesulfonic подготовки кисловочный

Высокоэффективный метод приготовления буфера 1,4-пиперазинидиэтаносульфонической кислоты

Пиперазин дитансульфоновая кислота PIPES имеет различные буферные системы,из которых буферный раствор Transformation Buffer (также называемый раствором ТБ) может быть использован для подготовки высокоэффективных компетентных клеток.

Competent state refers to a special physiological state in which cells (or bacteria) can take up DNA molecules from the surrounding environment and are not easily broken down by restriction endonucleases in the cellНекоторые бактерии обладают естественной компетентностью, например, Bacillus subtilis, а некоторые - искусственной, например, Escherichia coli.Обработка клеток-реципиентов специальным методом может изменить проницаемость клеточной мембраны, что делает его компетентной клеткой, которая позволяет молекулам-носителям с чужой ДНК проходить.

Компетентное ТБ раствор сырье-ПИПЕС порошок

Приготовление буфера трансформации:

Для преобразования компетентных бактериальных клеток используется метод хлорида кальция.37 градусов за ночь, пока не вырастет одна колония.Выберите колонию диаметром 1-3 мм, чтобы привить SOB в 250 мл / 3 л колбе Эрленмайера или 80 мл / 1 л колбе Эрленмайера. Инкубируйте при 18 градусах при 150-250RPM в течение 19-50 ч.Прекратите культуру, когда OD600 приблизится к 0.4-0.8, охладить в 4 градусов ледяной воды в течение 10 минут, центрифугировать при 300 оборотах в минуту в течение 15 минут, восстановить бактерии после удаления наднаселения, суспендировать в 1/3 объема ледяного раствора туберкулеза,и снова центрифугировать в течение 10 минут, чтобы восстановить бактерии. суспендировать с объемом 1/12,5 ТБ, добавить DMSO с конечной концентрацией 7%, а затем охладить в течение 10 минут в аликвотах 0,1-1 мл и хранить непосредственно в жидком азоте или при температуре -80°C.

В растворе туберкулеза из суспендированной кишечной палочки Escherichia coli основные компоненты включают буфер PIPES и хлорид кальция для преобразования клеток в компетентные.Следует отметить, что этот метод подходит для E. штаммы кишечной палочки, которые не содержат плазмиды, и не подходят для больших плазмид. эффективность трансформации может быть снижена после криоконсервации.оптимальная доза 600 различных штаммов бактерий также отличается, и необходимо корректировать в соответствии с различными экспериментами.

Существует множество методов подготовки компетентных клеток туберкулеза, и эффективность различных методов может отличаться, а применимые штаммы или типы клеток также могут отличаться.PIPES, производимый компанией Desheng, представляет собой порошкообразующий реагент., и компетентные растворы ТБ могут быть подготовлены в соответствии с различными потребностями.

Desheng Biochemical является производителем, специализирующимся на производстве биологических буферов в Китае.4- ((2-гидроксиэтил)-1-пиперазинетансульфоновая кислота, 3-циклогексиламинопропанесульфоновой кислоты и т.д., все с чистотой более 99%, если необходимо деловые друзья из вас могут связаться с нами!