Преимущества биобуффер ХЭПЭС в культуре клетки

HEPESявляется важным биохимическим препаратом в биохимической промышленности. Он считается одним из важных буферов в области биологических исследований. Химическое название HEPES:N-гидроксиэтилпиперазин-1-этаносульфоническая кислота, характер белого кристаллического порошка, является слабой кислотой, часто используемой в качестве звиттерионного буфера и фармацевтического промежуточного вещества в органической химической промышленности.Он часто выбирается в качестве буфера для клеточной культуры из-за его преимуществ.:

Местонахождение и буферные продукты Desheng

1Способность разложения HEPES может увеличиваться с увеличением температуры и ослабевать с понижением температуры, но по сравнению с другими буферамиЕго постоянная разложения не сильно меняется с температурой, что делаетБуфер HEPESБуфер может контролировать постоянный диапазон pH в течение более длительного периода времени и не оказывает токсического воздействия на клетки.

2pH требуется для большинства клеток 7.2-7.4, HEPES имеет хорошую буферную способность в этом диапазоне, но оптимальное значение pH зависит от типа культивируемой клетки.В то время как субкультурные клеточные линии требуют кислотного рН (7Большинство культурных сред используют для буферизации бикарбонат натрия (NaHCO3) и систему CO2.Концентрацию CO2 в газовой фазе следует сбалансировать с концентрацией бикарбоната натрия в культуровой среде.В этом случае крышку бутылки с клеточной культурой не следует слишком сильно закручивать для обеспечения газообмена.

Однако, после хранения в течение определенного периода времени, pH буферной системы увеличивается с изменением температуры CO2.раствор культуры быстро становится фиолетовым, когда клетка подкультурируется и вдыхаетсяДаже если он выживет, его активность также очень низкая, и скорость распространения очень медленная.Добавление HEPES в раствор культуры может избежать этой проблемы. HEPES может использоваться в качестве буфера для замены бикарбоната для устранения ограничения высококонцентрированной среды культуры CO2. Окончательная концентрация используемого буфера HEPES обычно составляет 10-25мМ.

Как использовать HEPES:

1. HEPES может быть добавлен непосредственно в подготовленный раствор культуры в требуемой концентрации, а затем стерилизован путем фильтрации. Добавляется 2,38 грамма HEPES на 1000 мл раствора культуры,настроить pH до 7.2 с lN NaOH после растворения, фильтрации и стерилизации и использования В это время концентрация HEPES для использования составляет 10 ммоль/л.

2Перед использованием 99 мл раствора культуры добавляют в 1 мл раствора для хранения, и конечная концентрация применения остается 10 мммоль/л.l mol/L (100 x) Метод приготовления основного раствора HEPES: растворить 23, 8 г HEPES в 90 мл двойной дистиллированной воды, регулировать pH до 7, 5- 8, 0 с 1 Н NaOH, затем развести до 100 мл с водой, отфильтровать и стерилизовать, и выделить флаконы (2 мл/ бутылку), хранить при 4°C или - 20°C.

Desheng Biochemical напомнил, что когда используется в качестве буфера для культуры клеток,HEPES в культурной среде, подвергаемой воздействию видимого света в течение более 3 ч, будет вырабатывать перекись водорода, токсичную для клеток.Рекомендуется хранить среду культуры в темноте.