Электрофорез геля агарозы и ДНК

Электрофорез геля агарозы обыкновенно используемый метод для изоляции, идентификации и очищения частей ДНК. Когда молекулы ДНК плавают в геле агарозы, они имеют влияние обязанности и влияние молекулярной сетки. Молекулы ДНК отрицательно - порученный в решении пэ-аш над изоэлектрическим пунктом и движении к положительному электроду в электрическом поле. Должный к повторяющийся структуре костяка glycophosphate, то же самое количество двойной, который сели на мель ДНК имеет почти такую же чистую обязанность, поэтому они могут двинуть к положительному направлению на такой же скорости.

Различная концентрация геля агарозы может отделить части ДНК от 200bp к 50kb. В решении агарозы, низкая концентрация бромида ethidum (EB) была добавлена в решение агарозы. Диапазон ДНК 10NG смог быть обнаружен под ультрафиолетовым светом. В электрическом поле, отрицательно - порученная ДНК проникла к аноду в pH8.0.

Гель агарозы имеет следующие характеристики:

(1) молекулярный размер ДНК в матрице геля обратно пропорциональн к значению низкопробного логарифма, и большой молекула, медленный миграция.

(2) концентрация агарозы в специфическом размере линейной молекулы ДНК отличает гель агарозы в различной концентрации. Логарифм электрофоретической подвижности частиц (u) ДНК линейно связан с концентрацией геля (t).

(3) когда напряжение тока низко, тариф миграции линейных частей ДНК пропорциональн к подводимому напряжению. Однако, с увеличением интенсивности электрического поля, подвижность частей ДНК с различными молекулярными весами увеличит в различных рядах. С увеличением напряжения тока, будет уменьшен эффективный объем разъединения геля агарозы. Для того чтобы увеличить разрешение частей ДНК более больших чем 2KB, подводимое напряжение не должно превысить 5V/см.

(4) электрофорезное поведение ДНК температуры электрофореза в электрофорезе геля агарозы не повлияно на температурой электрофореза. Относительный тариф миграции частей ДНК различных размеров не изменяет значительно между 4 и 30 градусами, но гель с низкой концентрацией 0,5% или низкий гель точки плавления относительно слабы, предпочтительно на 4 градусах.

(5) врезанный краской бромид ethidium люминесцентной краски был использован для того чтобы обнаружить ДНК в геле агарозы. Краска была врезана в штабелированных низкопробных парах и вытянутой и надрезанной круговой ДНК, делая ее более твердым и уменьшая линейную подвижность 15%.

(6) состав буфера электрофореза ионной прочности и своя ионная прочность влияют на подвижность электрофореза ДНК. В отсутствии ионов, как неправильное использование дистиллированной воды для подготовки гелей, проводимость движения минимальных и ДНК едва ли. В высоком буфере ионной прочности (как буфер электрофореза 10 x), електропроводимостьь очень высокая и очевидная продукция жары.

Электрофорез геля агарозы также обыкновенно использован в изоляции и идентификация нуклеиновых кислот, как продукция карты эндонуклеазы идентификации ДНК, ограничения ДНК, etc. из-за своей удобной деятельности, простое оборудование, небольшой размер выборки и высокое разрешение, этот метод имеет, который стали один из общих экспириментально методов в генетической научно-исследовательской работе. Набор электрофореза геля агарозы содержит 10 агароза таблетирует, высоковольтное быстрое решение 15mL электрофореза, загрузка buffer6x ДНК 200 l, ножницы и руководства потребителя, с 8 отверстием 6*6, 6 отверстие 6*6, 13 отверстие 6*12, 18 отверстие 6*12 и другие спецификации.