Мы всегда добавляем буфферные разрешения проблемы выполняя электрофорез ДНК. Обыкновенно использовал буфферные разрешения проблемы включите TAE, которое содержит Tris, ацетат и ЭТИЛЕНДИАМИНТЕТРАЦЕТАТ, и TBE (Tris-борат-ЭТИЛЕНДИАМИНТЕТРАЦЕТАТ).
Что роль буфера? Одна из функций буфера поддерживать пэ-аш конюшни решения. Когда электрический ток проходит через воду, реакция оксидации происходит на аноде для генерации ионов кислорода и водопода; реакция уменьшения происходит на катоде для генерации ионов водопода и окисоводопода. Долгосрочный электрофорез сделает кислоту анода и катод алкалическими. Хорошая система буфера должна иметь сильную амортизируя емкость держать пэ-аш решения на обоих поляках по существу стабилизированным. Другая функция буфера электрофореза сделать решение имеет некоторую проводимость для того чтобы облегчить миграцию молекул ДНК. ДНК алкалическое вещество которое отрицательно - порученный во время электрофореза (буфер pH=8) и проникает от отрицательного электрода к положительному электроду.
Другой компонент буфера электрофореза ЭТИЛЕНДИАМИНТЕТРАЦЕТАТ, цель чего хелатировать плазма Mg2+ и предотвратить активация DNase во время электрофореза. В виду того что потребности нуклеиназы эти ионы, ЭТИЛЕНДИАМИНТЕТРАЦЕТАТ могут держать эти ионы твердо для избежания нуклеиновой деградации кислоты. Но она должна быть замечена что ионы магния также сомножители много энзимов, как энзимы ограничения, полимеразы ДНК, etc., поэтому концентрация ЭТИЛЕНДИАМИНТЕТРАЦЕТАТА вообще слишком не высока (обычно вокруг 1mM).
Так что лучшее, TAE или TBE? На самом деле, что должен я использовать для электрофореза ДНК? Он действительно зависит от цели вашего эксперимента. Позвольте нам взглянуть на разнице между 2.
1. Проводимость TBE больше чем это из TAE. Поэтому, сравненный с TAE, TBE реже причинить перегревать в танке электрофореза. TBE порекомендовано для долгосрочного электрофореза.
2. Борная кислота и АБС битор энзима, поэтому если вам нужно отделить ДНК электрофореза для реакции пищеварения, то порекомендованы, что использует TAE как буфферное разрешение проблемы электрофореза
3. TBE лучшее для отделять более небольшие части. Для частей более небольших чем 300bp, скорость миграции в TBE более быстра на геле агарозы 2%.
4. TAE соответствующее для разъединения больших частей. Части более большие чем 2kb проникнуть более быстро в TAE (в 0,8% гелях агарозы), и скорость около 10% более быстрое чем в TBE. TAE более соответствующее для спасения части ДНК. Сравненный с TBE, TAE имеет более высокое разрешение для supercoiled ДНК.
В сводке, вопрос ли TBE или TAE лучше нельзя обобщить. Самая соответствующая система буфера должна быть выбрана согласно специфической экспириментально цели. Биологический буфер начатый Desheng имеет широкий ряд буфера, и только использован этот вид буфера. Система может подготовить буфера с широким диапазоном значений пэ-аш, и может обеспечить различные спецификации упаковки. Буфера покупки на Desheng биохимическом, радушном посоветовать с и купить.
