Как рекомбинантная глицеролкиназа справляется с помехами при обнаружении?

Триглицериды (ТГ) являются важным компонентом липидов крови, и их концентрация является ключевым показателем для оценки риска сердечно-сосудистых заболеваний. В течение многих лет клиническое определение триглицеридов в основном основывалось на использовании наборов иммуноферментного анализа (ИФА). Одним из основных ферментов в этом методе является глицеролкиназа (GK), которая отвечает за катализ образования глицерин-3-фосфата из глицерина, инициируя серию ферментативных реакций и, в конечном итоге, определяя содержание ТГ посредством фотометрии. Однако традиционные природные источники глицеролкиназы часто сопровождаются мешающими ферментами, такими как NADH-оксидаза и каталаза, которые могут потреблять субстраты реакции или вызывать побочные реакции, что приводит к большим отклонениям и плохой воспроизводимости результатов определения. Столкнувшись с болевыми точками в этой отрасли, появилась рекомбинантная глицеролкиназа, которая ведет клиническое тестирование к новой эре точности благодаря своим характеристикам высокой чистоты и низкого уровня помех.

1, Проблема мешающих ферментов: «невидимый убийца» традиционного определения

В процессе иммуноферментного анализа для определения триглицеридов глицеролкиназа должна работать совместно с глицерофосфатоксидазой, пероксидазой и другими ферментами для получения хромогенных веществ посредством реакции Триндер. Однако, если препарат глицеролкиназы содержит NADH-оксидазу, она будет неспецифически разрушать NADH (восстановленный кофермент I), что приведет к снижению абсорбции; если присутствует каталаза, она будет разлагать перекись водорода, образующуюся в реакции, снижая интенсивность цвета. Наличие этих двух мешающих ферментов может вызвать отклонение от стандартной кривой в легких случаях и полностью аннулировать результаты определения в тяжелых случаях. Природные источники глицеролкиназ (например, полученные из бактерий или грибов) часто трудно полностью удалить из-за сложных процессов экстракции и трудностей очистки, что делает их узким местом, ограничивающим точность определения.

2, Рекомбинантная технология: очистка от источника и создание «чистых ферментов»

Прорыв в технологии рекомбинантной ДНК принес революционные изменения в производство глицеролкиназ. Введя ген глицеролкиназы в инженерные бактерии, такие как Escherichia coli, и оптимизировав условия экспрессии, рекомбинантная глицеролкиназа может достичь эффективной и контролируемой экспрессии. Что еще более важно, рекомбинантная система производства позволяет избежать сосуществования нескольких ферментов в природных штаммах, а последующие процессы прецизионной очистки, такие как хроматография и ультрафильтрация, могут эффективно удалять мешающие компоненты, такие как NADH-оксидаза и каталаза. Чистота рекомбинантной глицеролкиназы составляет более 95%, что намного выше, чем у препаратов природных ферментов, отсекая путь загрязнения мешающими ферментами от источника.

3, Повышение стабильности: научный ответ на проблемы чувствительности к температуре

Хотя рекомбинантная глицеролкиназа имеет значительные преимущества в чистоте, ее стабильность в средах выше 45 ℃ низкая, что когда-то было одним из препятствий для ее широкого применения. Благодаря модификациям белковой инженерии, таким как сайт-направленный мутагенез и рациональный дизайн, исследователи успешно улучшили термическую стабильность ферментов. В то же время оптимизация буферной системы и комбинации защитных агентов в составе (обращая внимание на избежание негативных последствий трегалозы) дополнительно увеличила срок хранения и продолжительность использования активности ферментов. В настоящее время высококачественная рекомбинантная глицеролкиназа может поддерживать активность в течение длительного времени при 4 ℃ и надежно работать в условиях определения при комнатной температуре, полностью удовлетворяя требованиям хранения и эксплуатации набора реагентов.

Компания Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. всегда придерживалась философии производства и эксплуатации «качество прежде всего, технологическое лидерство» и «инновации и стремление к совершенству», постоянно исследуя и разрабатывая реагенты, необходимые в области диагностики. С момента своего основания в 2005 году она имеет почти 20-летнюю историю и пользуется глубоким доверием и поддержкой пользователей. Диагностические ферментные реагенты , самостоятельно разработанные и произведенные компанией Desheng, продаются в различных частях мира. Если у вас есть какие-либо связанные потребности в закупках в ближайшем будущем, пожалуйста, свяжитесь с нами!