Подвержена ли инактивации активность глицеролкиназы? Не пропустите эти детали!

Глицеролкиназа, как ключферментный препараткатализируя метаболизм глицерина, имеет важное значение в биохимических исследованиях, клинической диагностике и промышленном производстве. Благодаря своим белковым свойствам на активность ферментов легко влияют различные факторы окружающей среды. Понимание этих влияющих факторов и принятие соответствующих мер по техническому обслуживанию имеют большое значение для обеспечения точности и воспроизводимости результатов экспериментов.

1,Влияние температуры на активность глицеринкиназы

Глицеринкиназа быстро подвергается необратимой денатурации и инактивации при температуре выше 60 ℃, а ее трехмерная структура постоянно меняется, теряя свою каталитическую функцию. Поэтому во время экспериментальных операций ферментный препарат всегда следует помещать в ледяную баню (0–4 ℃); Кратковременное хранение рекомендуется хранить в холодильнике при температуре 4-8 ℃; Длительное хранение должно осуществляться при температуре -20 ℃ или -80 ℃; Избегайте повторного замораживания и оттаивания, рекомендуется хранить после упаковки.

2,Влияние значения pH на активность глицеринкиназы

Активный центр фермента очень чувствителен к концентрации ионов водорода. Экстремальные условия pH (слишком кислые или сверхщелочные) могут нарушить распределение заряда и пространственную структуру ферментных белков, что приведет к необратимой инактивации. Вблизи изоэлектрической точки молекулы фермента выпадают в осадок, хотя иногда этот осадок можно повторно растворить путем регулирования pH, но это может сопровождаться потерей активности.

При проведении экспериментов, связанных с глицеринкиназой, для восстановления и разведения используют специализированные буферные растворы (такие как Tris HCl, HEPES и др.); Избегайте использования чистой воды или растворов без буферной способности для непосредственного растворения ферментных препаратов; Поддерживать pH реакционной системы в пределах оптимального диапазона фермента; Регулярно калибруйте pH-метр, чтобы обеспечить точность измерений.

3,Влияние силы сдвига на активность глицеринкиназы

Механические эффекты также часто упускаются из виду влияющими факторами. Интенсивное перемешивание, вихревые колебания или быстрое продувание могут создавать сильные сдвиговые силы, нарушая пространственную структуру молекул фермента и приводя к денатурации и инактивации, которые часто являются необратимыми. При смешивании следует использовать метод осторожного продувания; Вы можете использовать пипетку, чтобы медленно и неоднократно выдувать, всасывать и хорошо перемешивать; Избегайте использования оборудования для интенсивного перемешивания, такого как вихревые генераторы; Для ферментных препаратов, которые особенно чувствительны к силам сдвига, смешивание можно производить, медленно поворачивая центрифужную пробирку.

4,Влияние концентрации ионов соли на активность глицеринкиназы

Нормальная функция ферментов требует подходящей ионной среды, а прямое растворение чистой водой помещает фермент в низкоосмотическую среду, вызывая изменения в структурной гидратации и приводя к дезактивации. Между тем, отсутствие необходимых вспомогательных факторов, таких как ионы магния, также может влиять на активность ферментов. Поэтому для восстановления используется предоставленный специализированный буферный раствор; Убедитесь, что буфер содержит необходимые ионы соли для стабильной активности фермента; Добавьте необходимые вспомогательные факторы согласно инструкции.

5,Влияние других факторов на активность глицеринкиназы

Помимо основных факторов, упомянутых выше, необходимо отметить и некоторые другие аспекты: с точки зрения времени хранения, даже при оптимальных условиях хранения активность фермента со временем будет медленно снижаться; Что касается концентрации белка, чрезмерное разведение может повлиять на стабильность фермента; Что касается окисления, некоторые ферменты чувствительны к окислению и требуют добавления восстановителей для защиты; Микробное загрязнение может привести к ферментативной инактивации. Рекомендуется регулярно проверять сроки хранения ферментных препаратов на складе; Избегайте чрезмерного разведения ферментных препаратов; Ферменты, чувствительные к окислению, следует дополнять соответствующим количеством ДТТ или β-меркаптоэтанола; Содержите экспериментальную среду в чистоте и избегайте микробного загрязнения.

Для обеспечения достоверности результатов эксперимента рекомендуется соблюдать следующие правила эксплуатации: перед экспериментом внимательно прочитать инструкцию по эксплуатации; Прежде чем вынимать ферментный препарат, подготовьте все реагенты и инструменты; Строго соблюдайте рекомендуемую рабочую температуру проведения эксперимента; Используйте свежеприготовленный буфер и реакционные реагенты; Установите соответствующий положительный и отрицательный контроль; Подробное описание условий и методов эксперимента.

Компания Hubei Xindesheng Material Technology Co., Ltd. создала профессиональную команду по подготовке ферментов для разработки и производства ферментных препаратов, подходящих дляреагенты для диагностики in vitroи другие поля. В настоящее время ферментные препараты, доступные для продажи, включают глицеринкиназу, уриказу, лактатдегидрогеназу, креатинкиназу и т. д. Если у вас возникнут какие-либо потребности в закупках в ближайшем будущем, пожалуйста, не стесняйтесь спрашивать!