Оптимизирование метода ВЕРХНИХ ЧАСТЕЙ для определения свободных жирных кислот

Для определения свободных жирных кислот в сыворотке или плазме обычно применяется фотометрический метод триндерского хромогенного фермента.на обнаружение жирных кислот влияет множество факторов, и метод обнаружения должен быть оптимизирован и улучшен для повышения точности обнаружения.

Принцип FFA обнаружения триндера хромогена:

Метод обнаружения имеет три этапа реакции: свободные жирные кислоты (FFA или NEFA) реагируют с избытком CoA для получения ацил-CoA под действием ацетил-CoA синтеза (ACS),и реагируют с кислородом под действием ацетил-КоА оксидазы (ACO)Реакция генерирует 2,3-транс-эноил CoA и перекись водорода, и реакция Триндера используется для обнаружения перекиси водорода, и содержание FFA может быть получено.

Для определения FFA хромогена рекомендуется TOPS

Проблемы в методах определения и оптимизации FFA:

1Чрезмерное содержание коэнзима А в реакции будет мешать реакции перекиси водорода и хромогена Триндера, что приведет к низкому результату теста.N- этилмалеимид (NEM) может быть использован для удаления избытка коэнзима А.Стабильность НЭМ сильно нарушена.

2Используемые ацетилкоасинтеза и ацетилкоаоксидаза имеют различные специфические свойства субстрата для различных свободных жирных кислот, что вызывает различия в результатах определения.Различные источники ферментов имеют различную специфику субстрата для свободных жирных кислот с различной длиной цепи CВ сыворотке человека есть 6 видов FFA, и только ферменты с высокой специфичностью к ним не могут иметь никакого значения в результатах измерения.

3Из-за влияния CoA на реакцию линейный диапазон результатов данных узкий. Цвет FFA, измеряемый на рынке, MEHA, TBHB, TOOS и т. д., но он сильно влияет на CoA,и это должно быть чрезмерно, поэтому требуется вмешательство. Меньше хромогена. SCEP не вмешивается коэнзимом А, но является нестабильным. ADOS и TOPS меньше вмешиваются CoA, а TOPS имеет более высокий коэффициент молярной абсорбции,так что это лучший хромогенный субстрат.

4. Добавьте сульфгидрильный комплекс DTNB и MIT для уменьшения количества NEM. Сульфгидрильная группа DTNM может реагировать с сульфгидрильной группой CoA для устранения помех хромогену.Небольшое количество MIT может удалить сульфгидрильную группу CoA и также действует как консервантОсновываясь на использовании хромогена TOPS, вмешательство CoA может быть полностью устранено, и стабильность значительно улучшена.

Если у вас более высокие требования к результатам определения FFA, вы можете выбрать набор лучшего качества на основе вышеуказанных пунктов.Компания Desheng производит сырье для комплектов определения FFA и других индексовЕсли TOPS используется для непосредственного определения FFA, из-за низкой стабильности раствора рекомендуется приготовить рабочий раствор для немедленного использования перед использованием.