Оптимизирование метода ВЕРХНИХ ЧАСТЕЙ для определения свободных жирных кислот

Определение свободных жирных кислот в сыворотке или плазме обычно принимает метод энзима хромогена Trinder фотометрический. Однако, должный к характеристикам этого теста, обнаружение жирных кислот повлияно на много факторов, и методу обнаружения нужно быть оптимизированным и улучшенным для того чтобы улучшить точность обнаружения.

Принцип обнаружения FFA хромогена Trinder:

Метод обнаружения имеет 3 шага реакции: свободные жирные кислоты (FFA или NEFA) реагируют со сверхнормальным CoA для генерации ацил-CoA под действием synthase ацетил-CoA (ACS), и реагируют с кислородом под действием оксидазы ацетил-CoA (ACO). Реакция производит 2,3 транс--enoyl CoA и перекись водорода, и реакция Trinder использована для того чтобы обнаружить перекись водорода, и содержание FFA можно получить.

ВЕРХНИЕ ЧАСТИ порекомендованы для определения FFA хромогена

Проблемы в методах определения и оптимизирования FFA:

1. Чрезмерный кофермент a в реакции помешает с реакцией перекиси водорода и хромогена Trinder, делая весь низкий уровень результата теста. N-ethylmaleimide (NEM) можно использовать для того чтобы извлечь сверхнормальное A. кофермента. Стабильность NEM очень затронута. Ограниченный, только одна неделя.

2. Используемая оксидаза CoA синтетазы и ацетила CoA ацетила имеет различные характерности субстрата для различных свободных жирных кислот, причиняя разницы в результатах определения. Различные источники энзима имеют различные жирные кислоты характерностей субстрата бесплатно с различными длинами цепи c. То есть, емкость ответа другая. 6 видов FFA в человеческой сыворотке, и только энзимы с высокой характерностью к ним могут не внести изменения никакой в результатах измерения.

3. Должный к влиянию CoA на реакции, линейный пробег результатов данных узок. Цвет FFA измерил на рынке MEHA, TBHB, TOOS, etc., но он значительно помешан CoA, и он должен быть чрезмерен, поэтому взаимодействие необходимо. Меньше хромогена. SCEP нет помешало коферментом a но неустойчиво. СУЕТЫ и ВЕРХНИЕ ЧАСТИ более менее помешали CoA, и ВЕРХНИЕ ЧАСТИ имеют более высокий молярный показатель поглощения, поэтому это лучший субстрат хромогена.

4. Добавьте сульфогидрильное сложное DTNB и MIT для уменьшения количества NEM. Сульфогидрильная группа в составе DTNM может прореагировать с сульфогидрильной группой в составе CoA для того чтобы извлечь взаимодействие к хромогену. Небольшое количество MIT может извлечь сульфогидрильную группу в составе CoA и также действует как предохранитель. Основанный на пользе хромогена ВЕРХНИХ ЧАСТЕЙ, взаимодействие CoA можно совершенно исключить, и стабильность значительно улучшена.

Если вы имеете более высокие требования для результатов определения FFA, то вы можете выбрать лучший качественный набор основанный на вышеуказанных пунктах. Desheng производит сырье для FFA и других наборов определения индекса. Если ВЕРХНИЕ ЧАСТИ использованы для того чтобы определить FFA сразу, то должный к плохой стабильности решения, порекомендованы, что подготавливает рабочий раствор для немедленной пользы перед использованием.