Буфер HEPESявляется 4-гидроксиэтилпиперазино-этаносульфонической кислотой (N?? -a-гидроксиэтилпиперазино-N?? -этаносульфановой кислотой), белым кристаллическим порошком, буфером для ионов водорода, который может контролировать постоянный диапазон pH в течение длительного времени.Эффективный буферный диапазон pH 6,8-8.2Обычно используется для приготовления буфера для лизиса белка, буфера для клеточной культуры и т. д.
Константа диссоциации HEPES равна 7.5При эквимолярном смешивании HEPES и его Na-HEPES pH раствора составляет 7.5Обычно сначала готовится фиксированная молярная концентрация HEPES, а затем pH регулируется до указанного значения с помощью сильной основы (обычно используемого NaOH).NaOH служит только для получения OH. Также можно использовать другие сильные основы, такие как KOH. Когда разница pH велика, используйте концентрированный NaOH. Для тонкой настройки используйте разбавленный NaOH. Если твердый NaOH добавляется непосредственно, то NaOH может быть добавлен в раствор.ошибка слишком большая, и когда NaOH растворяется экзотермично и изменение температуры может повлиять на точность электрода pH.
Приготовление буфера лизиса HEPES:
Раствор лиза А:
Раствор лиза B:
HEPES
10 мммоль/л, рН7.9
HEPES
20ммоль/л, рН7.9
KCl
10 мммоль/л
NaCl
420 мммоль/л
MgCl2
10, 5 мммоль/л
MgCl2
10, 5 мммоль/л
DTT
1 ммоль/л
DTT
00, 5 мммоль/л
甘油
5%
глицерин
25%
ЭДТА
0.2ммоль/л
ЭДТА
0.2ммоль/л
NP-40
1%
PMSF (добавляется перед употреблением)
1 ммоль/л
PMSF (добавляется после использования)
00, 5 мммоль/л
апротинин
3 мг/л
апротинин
5 мг/л
леупептин
3 мг/л
леупептин
5 мг/л
Пепстаин
2 мг/л
Пепстаин
3 мг/л
Шаги:
1Соберите клетки в EP-трубку и центрифугируйте (4000 р/мин, 5 мин, 4 градуса).
2Трижды промыть с помощью ПБС, центрифугировать, как выше, и выбросить суперанатант.
3Добавить 100 мкл буфера А, инкубировать на льду в течение 10 мин, центрифугировать (14000 р/мин, 1 мин) и выбросить суперанатант.
4. Пересохнуть гранулу в 60 микролитров буфера B, хорошо перемешать, центрифугировать на льду в течение 30 мин, центрифугировать (14000 р/мин, 15 мин, 0 градусов), собрать надводный материал и выбросить гранулу.
Среди них роль лизата А в основном используется для высвобождения цитоплазматических белков и белков мембраны, лизат В используется для высвобождения ядерных белков, NP-40 является одновременно поверхностно-активным и моющим средством,Его роль заключается в том, что он разрушает клеточную мембрану (легко)., и может сочетаться с выделяемым белком для предотвращения осаждения,Таким образом, большая часть цитоплазматического белка и белка мембраны может быть удалена после того, как наднаселение удаляется путем центрифугирования в первом этапеПосле извлечения ядерного белка его можно диализировать лизатом А в течение 2 часов и комбинировать для ИП;или разбавлены другими растворами и заменены концентрированными центрифужными трубками для IP или других испытаний.
Основными сырьевыми материалами диагностических реагентов Desheng являются: 1.Биологический буфер 2. химиолюминесцентные реагенты люминол, изолюминол, эфир акридина DMAE-NHS, эфир акридина NSP-DMAE-NHS, соль акридина NSP-SA,Соль акридина NSP-SA-NHS, акридин гидразид NSP-SA-ADH, акридин-эстер ME-DMAE-NHS; 3. реагенты нового Триндера TOOS, TOPS, ADOS, ADPS, ALPS, DAOS, HDAOS, MADB, MAOS; 4.Гель для антиизлучения для отделяющих приборов для сбора крови, натрия гепарина, лития гепарина, EDTA-2K3K, EDTA-2NA, способствуют коагулянту, порошку коагуляции и т. д. Кроме того, он также производит вирусные транспортные средства и карбомер 940/980.Приветствую друзей, которые пришли купить..